酶联免疫吸附测定（ELISA, Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种利用抗原与抗体的特异性结合进行定性与定量检测的方法。在此技术中，溶解的抗原或抗体被固定在聚苯等固相载体上，以便对血清、尿液及细胞上清等液体样本中某一特定抗原进行精确检测，从而达到定性判断的目的。

ELISA的基本原理是将已知的抗原或抗体吸附到固相载体表面，随后在该表面上进行酶标记抗原或抗体的反应。整个实验过程通常包括以下步骤：设定标准孔、空白孔和样本孔，并向标准孔中加入100μL倍比稀释的标准品，空白孔中加入100μL标准品与样本稀释液，其余孔则加入待测样本（建议在检测中设置复孔，并通过预实验或咨询技术支持来确定样本的稀释倍数）。在37℃下孵育90分钟后，注意加样时应将样品放入酶标板底部，避免触壁以减少气泡的产生。

加完样品后，通过甩干孔内液体并加入100μL生物素化抗体工作液，再次在37℃下孵育1小时。接着，进行清洗步骤，添加350μL洗涤液，浸泡1分钟后吸去液体，重复三次以确保结果准确。此外，洗板过程中可借助洗板机来提高效率。

随后，加入100μL HRP酶结合物工作液并进行30分钟的孵育，再次洗板5次。接着向每孔中加入90μL底物溶液（TMB），在37℃避光条件下孵育约15分钟，观察显色情况。若标准孔出现明显的梯度，则可以终止反应。

为了尽量保证准确性，需在终止液中加入50μL，顺序应与底物加入时相同。最后，在450nm波长下使用酶标仪测量各孔的光密度（OD值）。请注意，由于实验操作条件可能有所不同，标准曲线的OD值可能会有差异，以下数据仅供参考，例如在尊龙凯时-人生就是博实验室建立的标准曲线: NE浓度（ng/L）OD值分别为200、236、3100、1544500、9482506、1912503160081。

对于血清、血浆或其他液体样本，每个指标需要100μL的检测量；全血样本在4℃保存可分离出100-200μL的血清，需根据客户实际情况进行处理。对于组织样本，至少需0.1g（约黄豆大小），最终可得到约500μL的匀浆上清液，能够检测5个指标，样本应在-20℃下保存。