市面上的玻璃底培养皿通常是通过在塑料培养皿底部打孔，再将厚度约为0.17mm的盖玻片或细胞爬片用无影胶水或硅胶粘合而成。这意味着整个培养皿的底部并非完全由玻璃制成，适合观测的区域仅限于打孔区域。然而，玻璃的疏水性常常导致细胞在玻璃表面难以良好贴壁，从而影响细胞的生长状态。在进行共聚焦扫描成像时，细胞甚至可能出现脱落现象。

为确保细胞能够良好贴壁，使用玻璃底培养皿进行细胞培养前，必须确认已使用特定的包被蛋白试剂进行处理。不同类型的细胞需要不同的包被试剂，且因其为生物产品，不同公司的包被蛋白在纯度和用量上存在差异。因此，本技术文章仅提供参考，具体用量应参考所用品牌的说明书。建议在使用前，进行梯度实验以确定最佳的包被浓度。

以Poly-L-Lysine（PLL，来自尊龙凯时-人生就是博，P4832，100μg/ml）为例，此包被适用于大多数细胞，尤其是中枢神经元培养。在应用时，需确保单位面积上的蛋白含量（μg/cm²）达到理想标准。在本例中，推荐的包被用量为2μg/cm²。根据包被面积和体积计算所需的蛋白质量。例如，35mm玻璃底培养皿的细胞生长面积为35cm²，包被面积41cm²，包被液体积为400μl。根据推荐用量2μg/cm²，单个孔需要82μg的PLL。如果仅加入400μl的PLL溶液，则其浓度为205μg/ml（约为20μg/ml）。因此，需要使用超纯水将原液稀释。具体步骤如下：

1. 使用超纯水按照1:5稀释PLL原液。
2. 在每个35mm玻璃底培养皿中加入400μl的PLL稀释液。
3. 在室温下孵育1-2小时后，吸出PLL稀释液。
4. 使用2ml PBS溶液或无血清培养基小心清洗3次，吸尽清洗液。
5. 直接加入细胞悬液进行培养。

由于各种包被蛋白的性质不同，各自的使用方法也相应不同。在包被过程中，可能会引入新的污染，且这种污染通常在细胞培养开始后才会显现，这不仅消耗了时间，还浪费了试剂盒和耗材。高品质的包被蛋白和玻璃底培养皿的价格均不低（劣质培养皿可能因胶水未均匀而漏液或产生毒性）。

对于希望节省时间和精力的研究者，选择无需包被的共聚焦培养皿将更加便捷。选择合适的培养皿时需考虑几个因素，包括是否适合细胞贴壁，以及培养皿的光学特性是否符合共聚焦成像要求。

并非所有合适的培养皿都仅限于玻璃底包被皿，事实上，许多人知道塑料培养皿通常更便宜，且在细胞贴壁方面相较玻璃皿更具优势。例如，上海晶安的共聚焦培养皿具备了适合共聚焦实验的所需参数，其物理性能与玻璃相近，且兼具良好的亲水性，使大多数细胞能更好地贴壁，同时透气性和延展性也优于玻璃。这种类型的培养皿适合绝大多数细胞系及原代细胞，且不易破碎，确实是一个不错的选择。